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常见问题(FAQ):高效液相色谱法和超高压液相色谱法

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  1. 我可以在LC色谱柱上注入多少样品,同时避免带宽?
  2. 如果我改变柱的大小,我应该改变多少注射量?
  3. 如果样品溶剂比流动相强,会发生什么情况?
  4. 通过将样品注入较弱的注入溶剂(如100%水用于反相),是否可以获得更清晰的峰?
  5. 如何处理反压增加和其他堵塞或污染的迹象?
  6. 如何确定LC的总柱体积或空隙体积?
  7. 为什么我在紫外线上看到联苯柱出血,但在质量规格上看不到?
  8. 用高效液相色谱法分析炸药(按照EPA方法8330B),我应该使用什么?

    猛禽LC列
  9. 联苯基猛禽与其他新色谱柱有何不同?bob手机网页版 秀目
  10. SPP硅基色谱柱究竟如何产生更高的效率和分辨率?
  11. Raptor联苯柱在首次使用前是否需要进行特殊调节,或者是否处于闲置状态?
  12. 在Raptor联苯柱上梯度运行之间需要多少平衡时间?
  13. 哪些流动相溶剂与SPP或Raptor色谱柱相容?
  14. 我可以通过Raptor联苯柱向后泵送溶剂来清洁它吗?
  15. 我能在猛禽纵队上注射多少?
  16. Raptor ARC-18柱与普通C18柱有何不同?
  17. 猛禽ARC-18柱在酸和碱方面的工作情况如何?
  18. Raptor ARC-18色谱柱能与100%水流动相使用吗?
  19. 我们怎么知道迅猛龙的柱子是坚固的?

    警卫队列
  20. 我需要什么类型的LC保护柱系统?
  21. 我的UHPLC专栏有没bob手机网页版 秀目有配套的Restek guard盒带?
  22. 我应该使用哪种防护弹?
  23. 我的三叉戟防护系统应该使用哪种盖玻璃料?
  24. 我可以使用Restek防bob手机网页版 秀目护墨盒与我的列从另一个供应商?

    硬件
  25. 在我的HPLC色谱柱的末端配件上螺纹的尺寸是多少?
  26. “10-32”是什么意思?
  27. 除了10-32外,LC还使用其他尺寸的螺纹吗?
  28. HPLC不锈钢配件与聚合物配件有何不同?
  29. 哪些配件可以用于UHPLC?
  30. 我如何收紧我的配件?
  31. 我应该使用哪些配件来安装哪些管子?
  32. 我如何知道LC管道的内径是多少?

    HILIC的方法
  33. 如何避免HILIC方法的问题?
  34. 我的猛禽HILIC Si柱准备好开箱即用了吗?
  35. 我应该在两次注射之间平衡我的Raptor HILIC Si柱多长时间?
  36. 我应该使用什么样的注射溶剂进行HILIC分离?
  37. 在HILIC分离时,我需要注意什么样的pH值影响?
  38. 我可以使用缓冲液进行HILIC分离吗?什么种类和浓度?

    什么是PFAS延迟列?
  39. 什么是PFA?
  40. 什么是GenX和PFBS?
  41. 什么样的实验室进行PFAS测试?
  42. 什么是典型的PFAS分析水平?
  43. PFAS分析与其他LC-MS/MS分析有什么不同?
  44. 我如何知道我的LC系统是否有PFAS污染?
  45. 为什么从我的样本中分离系统相关PFA很重要?
  46. PFAS延迟栏有什么帮助?

如果你的问题没有出现在列表中,请联系Restekbob手机网页版 秀目的专家化学家,以帮助对HPLC和UHPLC系统和分析进行故障排除。(记得写上你的公司名称和完整的邮寄地址。)

1.我可以在LC色谱柱上注入多少样品,同时避免带宽?

注入体积以及最佳流量都受到柱的大小的限制。理想情况下,如果样品与流动相在同一溶剂中,近似体积应如下所示:

列ID 体积(微升)
2.1毫米(30-100毫米长) 1-3
3.0-3.2毫米(长度50-150毫米) 2-12
4.6毫米(50-250毫米长) 8-40

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2.如果我改变柱的大小,我应该改变多少注射量?

最佳喷射体积直接与柱的圆柱体体积有关,因此取决于横截面积(A=πr2)和列的长度(L)。既然如此,您就可以根据现有的注入量方法来估计任何调整。

如果要转换为不同的尺寸ID(包装材料和长度保持不变),只需将当前体积乘以半径平方比,即可确定新方法的正确体积。例如,如果您当前正在150 x 4.6 mm柱上注入20µL,然后切换到150 x 3.0 mm柱,则可以通过乘以20 x(1.5)来估计调整后的体积2)/(2.32).您的新容量应为8.5µL左右。

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3.如果样品溶剂比流动相强,会发生什么情况?

我们不建议注入强溶剂,因为它通常会导致峰畸变、展宽、灵敏度差和保留时间缩短。这是因为一些分析物在色谱柱中的移动速度太快,而不是在对称的色谱带中洗脱。如果你一定要这样做,保持体积尽可能小,并确保溶剂是可混溶的。

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4.通过将样品注入较弱的注入溶剂(如100%水用于反相),是否可以获得更清晰的峰?

在这种情况下,样品最初集中在色谱柱的顶部,并以紧密的带穿过色谱柱。这种技术被称为“柱上压缩”或“点注入”,有时用于最大限度地减小更大体积样品注入的频带展宽(见上文常见问题8)。请记住,您的样品成分也必须溶于流动相,这样才能起作用。

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5.如何处理反压增加和其他堵塞或污染的迹象?

请遵循我们博客中的建议”对高效液相色谱法施加压力?这将帮助你识别或确认压力的来源。如果发现柱本身是困难的来源,请按照我们给出的柱再生步骤LC柱清洗建议页为了避免将来发生这种情况,Restek强烈建议使用保护柱,以保护反相和正相分析bob手机网页版 秀目液相色谱柱免受熔块堵塞和色谱柱污染。

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6.如何确定LC的总柱体积或空隙体积?

“柱体积”一词通常是指空隙体积,它代表在二氧化硅颗粒之间流动相的体积。这个区域称为间隙区。你可以通过乘以总柱体积(x半径)来估计空隙体积2x长度)的一个系数,该系数用于估计特定柱类型的典型填料效率。对于全多孔柱,空隙体积(单位:mL)的方程为V=(0.68)pi r2式中V =柱体积,单位为mL, r =柱半径,单位为cm, L =柱长,单位为cm。对于表面多孔的色谱柱,如Raptor色谱柱,因子是不同的,方程为V = (0.50) pi r2L

空穴体积通常是通过注入标准品来进行实验估计的,该标准品含有已知在特定柱相上没有保留或可以忽略的分析物。反相高效液相色谱的一个很好的例子是尿嘧啶。应该注意,对于正在使用的特定工具,这个估计还会受到额外的列死体积的影响,因此可能会略有不同。

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7.为什么我在紫外线上看到联苯柱出血,但在质量规格上看不到?

少量的相出血是所有相固有的,包括苯基相,这在一定程度上取决于色谱柱的尺寸和尺寸。这种出血通常可以忽略不计,不影响保留时间,但可能是可见的,特别是通过紫外线检测。经过调理后,它通常可以减少。出血也可以通过等压洗脱、较浅的梯度和/或在两次冲洗之间采用梯度冲洗来减少。

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8.用高效液相色谱法分析炸药(按照EPA方法8330B),我应该使用什么?

虽然没有一种色谱柱可以为所有这些分析物提供基线分离猛禽联苯猛禽ARC-18来自Restek的列是初级bob手机网页版 秀目和确认分析的杰出选择。全孔高效液相色谱颗粒,即超C8超Aromax列也是一个选项。请记住,各种色谱相可能提供这种方法的部分解决方案,但Restek发现这些对提供了最佳结果。bob手机网页版 秀目

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猛禽LC列

9联苯基猛禽与其他新色谱柱有何不同?bob手机网页版 秀目

猛禽联苯由表面多孔的二氧化硅颗粒制成,通常缩写为SPP。SPP二氧化硅具有带多孔外层的实心芯,直径为HPLC颗粒的典型直径,在这种情况下为2.7µm。SPP柱显示出更高的效率和分辨率,通常接近基于全多孔二氧化硅的更小(如1.9µm)UHPLC颗粒。使用实心粒子还有几个额外的好处。SPP二氧化硅颗粒可以在高流速下运行,而不会显著影响色谱柱的分辨率,并且它们不需要像UHPLC色谱柱那样的高压系统组件。(在常规高效液相色谱系统上实现类似于UHPL的分离效果很好!)

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10.SPP硅基色谱柱究竟如何产生更高的效率和分辨率?

更高的效率主要是通过缩短溶质进出颗粒和流动相的转移时间来实现的,但也可以通过更均匀的颗粒尺寸来增强,从而实现更一致的填充。从更理论的角度来看,范迪姆特方程是解释这一现象的最佳方法。较短的板高度(H)表示效率较高。

Van Deemter方程描述了柱流量和峰值效率之间的关系,称为频带展宽。

图-article-GNOT3395-01.jpg

SPP二氧化硅的实心芯导致A和B项的值较低(涡流扩散和纵向扩散)而且,它能更好地传递溶质,转化为较低的传质组分值,即C项。因此,在高流速下,可以实现较短的理论板高度H和较高的效率。UHPLC颗粒也是如此,但对于正常分析尺寸的SPP颗粒,柱压不会降低与UHPLC的情况一样,SPP颗粒的形状通常也更均匀,并导致更一致的填充,这也提高了整体效率。所有这些因素都显著降低了我们通常与SPP硅胶柱相关的谱带展宽。

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11Raptor联苯柱在首次使用前是否需要进行特殊调节,或者是否处于闲置状态?

在大多数情况下,Raptor联苯柱的行为与任何其他反相柱一样。然而,在某些情况下,可能需要更长的平衡时间。在有机溶剂(如乙腈和甲醇)之间切换可能需要在高有机流动相中冲洗15-20分钟。

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12在Raptor联苯柱上梯度运行之间需要多少平衡时间?

无论您是使用全多孔二氧化硅还是SPP二氧化硅,如果您使用梯度,则需要一些平衡时间,并且这两种类型的柱的时间是相似的。通常,相当于7柱(空)体积是足够的,除非你使用离子对技术。

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13哪些流动相溶剂与SPP或Raptor柱相容?

任何通常用于反相LC的溶剂都可以正常工作,包括但不限于水、甲醇和乙腈。

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14我可以通过Raptor联苯柱向后泵送溶剂来清洁它吗?

类似于UHPLC色谱,这些色谱柱不建议反向流动。然而,你仍然可以泵过一系列溶剂,只要它们是混溶的。

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15.我能在猛禽纵队上注射多少?

进样量取决于许多因素,包括柱尺寸、样品溶剂和分析要求。色谱法通常是一种很好的做法,尽量少注入,注入的溶剂与流动相相同或较弱。bob娱乐官网

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16.Raptor ARC-18柱与普通C18柱有何不同?

显著的差异是键合相的坚固性。使用ARC-18,任何残留的硅醇基团都被屏蔽,并通过空间保护使其成为惰性。其结果是1.0–8.0的更宽操作pH范围。ARC-18在pH值为1.0和3.0之间特别有用,其他C18柱相可能在这些恶劣条件下开始降解。与Raptor联苯柱一样,固定相与表面多孔的二氧化硅颗粒(SPP)结合。请看我们的早期常见问题关于SPP的优势。

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17Raptor ARC-18色谱柱对酸和碱的作用如何?

ARC-18为荷电碱提供了额外的保留,在许多情况下,它比传统的端盖C18更好。对于中性酸,它工作良好,并且比端盖C18相更好,尤其是在pH<3时。ARC-18也适用于中性碱和荷电酸,但提供了更多优势,在较低pH ra下表现最好恩格斯。

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18.Raptor ARC-18色谱柱能与100%水流动相使用吗?

不。我们建议使用猛禽ARC-18立柱流动相中至少含有5%的有机物。对于需要较高水含量的应用,我们建议超水相C18Pinnacle DB水溶液C18色谱柱

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19.我们怎么知道迅猛龙的柱子是坚固的?

我们使用的玻璃料不太容易被样品基质堵塞,柱填料也不太可能被可能产生的更高压力损坏护柱还提供并建议进一步延长色谱柱的使用寿命。参观www.bob手机网页版 秀目restek.com/raptor为了查看这些列的使用情况,并将其与竞争对手进行测试,但作为最终的证明,我们鼓励您自己尝试一下。

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警卫队列

20.我需要什么类型的LC护柱系统?

保护柱系统由支架和墨盒组成,正确的选择取决于您所使用的技术和分析柱。bob手机网页版 秀目Restek提供了三种防护柱系统- exp、Roc和Trident(直接和内联的)-每一种设计都与我们的LC柱系列中的一种相匹配,并针对特定的技术。

EXP持有人和弹药
  • Holder兼容所有的HPLC通过UHPLC仪器和墨盒(额定20,000 psi [1400+ bar])。
  • 设计用于Raptor和Force LC柱。
Roc持有人和子弹
  • 与传统的HPLC仪器兼容。
  • 设计用于Roc HPLC柱。
三叉戟直接持有人和墨盒
  • 与传统的HPLC仪器兼容。
  • 设计用于传统HPLC柱(Ultra、Pinnacle II、Pinnacle DB、Allure、Viva)。
  • 有三个级别的保护。
三叉戟管内支架和弹药筒
  • 与传统的HPLC仪器兼容。
  • 设计用于传统HPLC柱(Ultra、Pinnacle II、Pinnacle DB、Allure、Viva)。
  • 需要一个耦合器连接到分析柱上。

有关更多详细信息,请参阅我们的LC护柱选择指南

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21我的UHPLC专栏有没有配bob手机网页版 秀目套的Restek guard盒带?

我们有用于Raptor 1.8µm UHPLC柱的保护盒和支架。作为UHPLC的替代方案,您可能会发现在线过滤器是有益的。

图-article-GNOT3395-02.jpg

超屏蔽UHPLC柱前过滤器

图-article-GNOT3395-03.jpg


UltraLine UHPLC在线过滤器

与我们的Trident直接保护系统类似,ultrasshield过滤器直接拧入入口的柱端配件。UltraLine过滤器需要在两侧连接油管;如果安装在喷射器和柱之间,则安装在喷射器和柱之间EXP耦合器建议使用。

另一个区别在于玻璃料或您可能称之为过滤器的材料。UltraShield装置有一个不可更换的钛过滤器。因此,整个过滤器组件被用作一次性物品。另一方面,UltraLine过滤器有一个可更换的不锈钢过滤器,可以根据需要订购更多的过滤器。

两个装置中的过滤器的孔隙率均为0.5µm,且两个支架组件的密封压力高达15000 psi。因此,它们在功能上是等价的。

UltraShield过滤器与Restek UHPLC柱的任何系列和相位兼容,而Raptor UHPLC防护装置与1.8µm力和1.bob手机网页版 秀目9µm Pinnacle DB UHPLC柱的匹配相位兼容。

有关更多详细信息,请参阅我们的LC护柱选择指南

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22.我应该使用哪种防护弹?

一旦你知道你需要哪个保护柱系统,下一步就是选择包装和尺寸最适合你的分析柱的LC保护筒。为了在不损害选择性或效率的情况下获得最大限度的保护,您应该选择包含相同包装材料的LC保护盒(包括固定相和硅胶)作为您的分析柱。例如,与Raptor联苯2.7 μ m分析柱配合使用的最佳LC保护柱是Raptor联苯2.7 μ m保护柱。

除了选择与分析柱相匹配的保护盒包装外,还需要选择内径(ID)正确的LC保护盒。一个好的一般规则是LC保护柱盒带ID应与分析柱的ID相同,或比分析柱的ID小一个尺寸。因此,4.0 mm内径的防护筒应与4.6或4.0 mm内径的分析柱一起使用,而2.1 mm内径的防护筒建议用于3.2、3.0和2.1 mm内径的分析柱。

看我们的LC护柱选择指南有关哪些防护与哪些特定的分析列兼容的详细信息。

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23我的三叉戟防护系统应该使用哪种盖玻璃料?

1级和3级三叉戟滤清器端部配件上的盖玻璃料将捕获较大的微粒,并最大限度地延长防护筒的使用寿命。根据样品基质的性质以及在某些情况下流动相混合物的性质选择孔隙度。孔隙率为2µm的玻璃料可在大多数情况下使用,订购时为标准尺寸。0.5µm玻璃料为未经预过滤或样品制备过程中缺乏清洁的样品提供了更好的保护。当使用粒径为3µm的分析柱或使用含有较高水平缓冲盐的流动相时,较小的孔隙率也可能更有利。

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24我可以将另一个供应商的Resbob手机网页版 秀目tek guard盒带用于我的专栏吗?

如果包装材料非常相似,则可将Ultra或Roc 5µm防护筒用于粒径为3µm或更大的全多孔颗粒(FPP)柱。对于“核壳”或表面多孔颗粒(SPP),Raptor 2.7µm或5µm防护罩可用于类似的相和粒径。对于小于2µm的FPP或SPP颗粒,Raptor UHPC防护柱可用于类似的相。确保使用适当的Roc、Trident或Raptor防护罩支架。与我们类似的一些柱固定相/包装材料如下:在这个图表中供参考。

在某些情况下,固定相可能非常独特,因此您可能需要从同一供应商处购买防护筒用品,以获得最佳效果。如果您对此有任何疑问,请随时致电我们。

我们建议只使用带有Restek保护墨盒的Restbob手机网页版 秀目ek保护墨盒持有人,以确保合适的配合。

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硬件

25.在我的HPLC色谱柱的末端配件上螺纹的尺寸是多少?

所有HPLC和UHPLC柱配件有10-32线程。然而,你会发现配件和柱从Waters, Rheodyne, SSI, Gasukura有不同的座位深度,如下所示,即使线程仍然是10-32。bob手机网页版 秀目Restek的通用10-32 PEEK柱连接器新的EXP配件将适应这些配置中的任何一种。

不同制造商的配件类型不同,但所有HPLC和UHPLC柱配件都有10-32个螺纹。

图-article-GNOT3395-04.jpg

帕克

图- - gnot3395 - 05.条jpg

瓦尔科

图- - gnot3395 - 06.条jpg

水域

图-article-GNOT3395-07.jpg

Rheodyne

图-article-GNOT3395-08.jpg

接头锁紧螺母
帕克-洛克

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26“10-32”是什么意思?

这是美国国家标准协会(ANSI)采用的命名约定。对于HPLC配件,第一个数字表明的直径螺纹部分的螺母(不是管,进入内部)。当直径小于1/4 "时,就像在这种情况下,使用测量值(测量值10)。连字符后面的数字是指每英寸的线程数,因此表示线程的“间距”。外螺纹尺寸和公差表可在这里:http://www.engineersedge.com/screw_threads_chart.htm

图-article-GNOT3395-09.jpg

10个仪表配件的直径约为3/16”。

图-article-GNOT3395-10.jpg

尺寸为10-32的配件每英寸的螺纹数为32。注意,第一个线程用于将配件对齐为零,并且不包含在线程计数中。

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27除了10-32外,LC还使用其他尺寸的螺纹吗?

10-32线程可能是您将使用HPLC的唯一线程。然而,您可能偶尔会看到¼x 28或M6 (M6 x 1的缩写形式)配件用于实验室设置或较低的压力连接。¼x 28的尺寸是基于10-32这样的英国测量单位。¼x 28螺纹的间距更大,直径略大,通常也不能承受更高的压力。M6配件是公制螺纹,实际上直径为6mm,间距为1mm。

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28.HPLC不锈钢配件与聚合物配件有何不同?

最明显的区别是,不锈钢配件被“锻造”到管子上。它们用扳手拧紧,螺母牢固固定后,套圈永久固定在管道上。尽管这产生了一个良好的密封,能够承受高压,但套圈无法拆除和重复使用。为了更换套圈或重新安装在新管道上,必须切割整个管件和一小段管道,以牺牲套圈和一小段管道。(通常,螺母仍可重复使用。)

图-article-GNOT3395-11.jpg

安装在Restek混合毛细管上的预涂层不锈钢配件(bob手机网页版 秀目第26533类

好消息是像Restek这样的聚合物配件bob手机网页版 秀目通用10-32连接器和混合套圈EXP配件,不需要对油管进行永久性锻造;因此,所有零件都可以重复使用。EXP接头特别有用,因为它们可以承受更高的压力,而套圈在某种程度上仍然可以重复使用。EXP接头可重复使用的次数与施加的扭矩量直接相关。当用手指拧紧接头时,套圈可以重复使用多次,而如果用扳手拧紧UHPLC接头,套圈可以重复使用几次。限制是由于套圈有一定程度的变形,而不是由于模锻。

图- - gnot3395 - 12.条jpg

PEEK指紧配件(第27710类

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29.哪些配件可以用于UHPLC?

你可以使用不锈钢配件,就像那些与你的UHPLC系统或你可以使用EXP配件。EXP配件可以使用到20,000 psi时,用扳手拧紧。在任何情况下,总是要确保你使用的是零死体积的配件,这样UHPLC提供的高效率不会因为额外的死体积而受到损害。

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30如何拧紧配件?

我们基于聚合物的通用接头和PEEK接头只需要手动拧紧,而任何不锈钢配件都需要用扳手拧紧。EXP配件可以以任何方式使用。手动拧紧可用于8700 psi或扳手拧紧可用于20000 psi。请注意,过度拧紧会导致磨损并损坏螺纹。需要用扳手拧紧的管件通常需要手动拧紧¼圈,以实现密封。不幸的是,没有通用扭矩设置。

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31我应该使用哪些配件来安装哪些管子?

图- - gnot3395 - 13.条jpg

惯例告诉我们要将管件材料与管材材料相匹配:将PEEK管件与PEEK管相匹配,将不锈钢管件与不锈钢管相匹配。主要原因是系统压力。然而,一些不锈钢管件可以与PEEK管一起使用。例如,EXP配件采用钛/PEEK混合结构,可与PEEK或不锈钢管一起使用。然而,如果考虑到惰性,则应避免使用不锈钢配件,PEEK配件是更好的选择。请注意,不建议PEEK与一些强酸溶液(如王水)一起使用,在某些条件下,它会受到卤化溶剂以及四氢呋喃的影响。不锈钢对于大多数流动相试剂和溶剂是安全的,但它的惰性更小,特别是对于无机酸、碱和氧化剂。

EXP配件采用钛/PEEK混合结构,可与PEEK或不锈钢管一起使用。

其他类型的管材,如PTFE和泰贡管材,与PEEK或聚乙烯(PE)配合良好配件、活接头和适配器。由于在低压应用中使用,这些配件中的许多不是螺纹配件,而是滑套式配件。这方面的一个很好的例子是HPLC中从瓶子/储罐到泵的流动相输送。这是一种低压输送(HPLC和UHPL系统将高压从泵输送到柱端),通常使用聚四氟乙烯管和聚四氟乙烯或聚乙烯管件。

图-article-GNOT3395-14.jpg

PEEK接头(猫#27715

图-article-GNOT3395-15.jpg

Bluestem玻璃溶剂过滤器

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32我如何知道LC管道的内径是多少?

图-article-GNOT3395-16.jpg

UHPLC系统采用肉眼无法识别的极窄口径油管。由于这个原因,油管长度是基于内径的颜色编码。bob手机网页版 秀目Restek提供不锈钢毛细管彩色带:红色= 0.005 ",黄色= 0.007 ",蓝色= 0.010 "和橙色= 0.020 "。颜色编码因制造商而异;它不是普遍的。同样重要的是,不锈钢毛细管应该由制造商切割长度,而不是由客户。如果没有专业的加工刀具,就不可能实现干净的方形切割。带预压卡箍的不锈钢管件或带混合卡箍的EXP管件与不锈钢管一起使用,在高达20,000 psi的UHPLC下实现密封性。

LC级不锈钢管的内径由管上的彩色带标识预切割长度

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HILIC的方法

33.如何避免HILIC方法的问题?

HILIC方法是一个强大的工具,特别是用于分析极性化合物,但它的实施可能具有挑战性,为了避免常见的陷阱,您需要注意几个重要的注意事项。我们的技术文章介绍HILIC技术,讨论常见问题领域,并帮助您成功地将HILIC方法纳入实验室的曲目。

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34我的猛禽HILIC Si柱准备好开箱即用了吗?

在使用之前,您的Raptor HILIC Si柱必须使用分析期间使用的流动相进行适当调节。对于等度HILIC方法,应使用至少50个柱体积,对于梯度HILIC方法,应至少执行10次空白进样,运行完整的时间程序。当您改变流动相组成或任何添加剂的浓度时,也需要调节。使用与第一次调节色谱柱时相同数量的色谱柱体积或空白进样。下表I给出了基于尺寸的Raptor HILIC Si柱的柱体积。

表我:基于Raptor HILIC Si柱尺寸的柱体积(mL)

列ID 列长度

30毫米

50毫米

100毫米

150毫米

2.1毫米

0.05

0.1

0.2

0.3

3.0毫米

- - - - - -

0.2

0.4

0.5

4.6毫米

- - - - - -

0.4

0.8

1.2

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我应该在注射之间平衡我的猛禽HILIC Si柱多长时间?

除了使用流动相对色谱柱进行初始调节外,在进样之间重新平衡色谱柱也是至关重要的。由于HILIC方法中的分离机制涉及到颗粒表面上水层的吸附,因此在两次注射之间完全重建或“重置”该水层以确保保留时间重现性非常重要。我们建议在梯度程序恢复到初始条件时,以至少10个柱体积进行平衡,或在等度分离中,从最后一个峰的保留时间开始,以至少10个柱体积进行平衡。完全再平衡所需的柱体积数量可能与分析物密切相关,尤其是等度分离,因此确保在HILIC方法开发过程中调查保留时间再现性。

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36我应该使用什么样的注射溶剂进行HILIC分离?

注入溶剂应尽可能接近于初始流动相条件,这是高有机含量的HILIC分离。通过将注入溶剂与初始流动相条件匹配,可以得到更好的峰形,提高保留率和更高的灵敏度。

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37.对于HILIC分离,我必须注意什么样的pH影响?

pH值对分析物荷态的影响取决于每种化合物的pKa,因此在方法开发过程中必须仔细评估pH值的影响。在HILIC方法中,流动相中有机溶剂的高浓度提高了pH值,实际洗脱液的pH值可以比单独的水部分高1-1.5个单位。柱本身的电荷状态也会受到影响。例如,在Raptor HILIC-Si色谱柱中,裸二氧化硅的pKa介于3.8和4.5之间,因此流动相pH改变了二氧化硅表面的电荷,使其在非常酸性的条件下呈中性,并在pH开始接近3.8或更高时电离(带负电荷)。由于这个原因,如果你的分析物有一个或多个质子化胺或季胺基团,它是Raptor HILIC-Si色谱柱上的一个很好的候选分析物。

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38.我可以使用缓冲液进行HILIC分离吗?什么种类和浓度?

许多HILIC分离使用质谱仪作为检测器,因此甲酸铵和醋酸铵等挥发性缓冲液非常常见。然而,流动相的高有机含量可能导致缓冲盐沉淀,从而导致仪器维护停机。此外,高缓冲液浓度可能影响色度通过减少分析物保留来进行原子谱分析。为了避免这些影响,需要进行方法优化,10 mM是缓冲液浓度的良好起点。a和B流动相应进行同等缓冲,以便在梯度期间保持离子强度恒定,以获得最一致的MS检测器响应。请与MS供应商联系r表示他们建议用于ESI源的最大缓冲液浓度。bob娱乐官网

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pfa延迟列

39什么是PFA?

PFA是全氟或多氟烷基物质,用作各种产品制造中的表面活性剂,如消防泡沫、涂料添加剂(如不粘锅和平底锅)、纺织品(防水服、防污地毯)和清洁产品。它们极难在环境中分解,在世界各地的土壤、空气、地下水、城市垃圾和垃圾填埋场渗滤液中都能找到。两种最常见的全氟辛酸(PFOA)和全氟辛烷磺酸(PFOS)。

图-article-GNOT3395-17.jpg

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40.什么是GenX和PFBS?

这两种化合物是在过去10年内制成的,用于取代全氟辛烷磺酸和全氟辛烷磺酸。对于GenX(六氟环氧丙烷二聚酸铵盐,或HFPO-DA,于2009年推出)和PFBS(全氟丁烷磺酸,于2003年发布)的安全性,仍然存在健康和环境方面的担忧,许多环境实验室开始对其与全氟辛烷磺酸和全氟辛烷磺酸进行测试。

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41.什么样的实验室进行PFAS测试?

PFAS分析由合同环境实验室、州和地方政府实验室以及市政水处理实验室完成。其他可能进行PFAS测试的实验室包括大学和食品和饮料实验室,测试其进水供应。PFAS测试最近也扩展到空气测试,因此空气质量实验室可能会将PFAS添加到其分析物列表中。

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42.什么是典型的PFAS分析水平?

PFAS检测水平因地区和基质(如饮用水、废水、海水、土壤等)而异。饮用水是公共健康最受关注的因素,许多环境机构正试图设定安全的消费水平。大多数都是以健康为基础的推荐水平,截至2019年2月没有相关规定。目前,在大多数国家,饮用水中大多数PFAS化合物的指定关注水平在低ppt (ng/L)范围内。下面给出了一些例子。

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43.PFAS分析与其他LC-MS/MS分析相比有什么不同?

LC-MS/MS分析是一种非常灵敏的选择性技术,可用于多种不同的应用,非常适合于多分析物分析。由于其化学/物理性质和长期惰性,塑料含氟聚合物,如聚四氟乙烯(PTFE),用于制造许多LC-MS/MS组件。在LC泵密封件、流动相传输线、脱气器中使用的塑料衬里等中可以找到PTFE。不幸的是,这些塑料零件会将PFAS滤入流动相,从而产生与系统相关的背景PFAS污染,干扰痕量PFAS分析。由于饮用水中的PFAS检测水平在ppt范围内,即使是轻微的干扰也会使定量分析产生偏差。

由于PFAS化合物的普遍使用,PFAS干扰也可能来自用于制造流动相的溶剂(甚至是新的瓶子)。全氟辛烷磺酸也存在于空气中,所以你可以假设全氟辛烷磺酸污染物在低浓度下无处不在。基本上,与系统相关的PFA来自LC-MS/MS工作流程所有阶段的组件,包括样品收集瓶、流动相盖/衬里(由PTFE制成)、溶剂入口管(通常为FEP或PFA)、脱气器、LC泵部件,甚至自动进样器小瓶隔片(许多是PTFE衬里硅胶)。

观察到的干扰程度因LC仪器制造商而异,还取决于方法参数(例如,平衡时间、溶剂选择、目标分析物等)。注意,平衡时间越长,干扰越大,因为PFA从塑料零件中滤出的时间越长。

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44.我如何知道我的LC系统是否有PFAS污染?

识别LC中PFAS污染的最简单方法是泵送流动相通过色谱柱30分钟,使系统相关的PFAS有机会在柱的顶部聚集。然后,注入溶剂空白,当梯度通过色谱柱时,建立在分析柱上的任何PFAS将洗脱,并在保留时间匹配样品中PFAS的洗脱时间出现。

接下来,在溶剂空白注入后立即注入另一个溶剂空白,平衡时间较长,并查看PFAS化合物的保留时间。第二次进样的目的是没有足够的时间让系统相关PFA在分析液相色谱柱中形成。

比较立即注入和长平衡时间注入的结果。如果在长平衡时间进样中有PFAS峰,但在随后的进样中没有,则LC含有系统生成的PFAS污染物,可能会干扰痕量分析。如果在两次进样中寻找的PFAS保留时间没有任何峰值,则仪器可能没有大量系统相关PFAS干扰。如果您将旧LC装置与新的质谱系统一起使用,则可能会发生这种情况,因为大多数与可浸出系统相关的PFA已经浸出。但是,这不是一个永久性的国家;如果在喷油器之前更换仪器任何部件中的塑料部件,则极有可能会滤除系统相关的PFAS干扰,除非新部件不含PFAS。

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45为什么从我的样本中分离系统相关PFA很重要?

如果您是在非常低的水平分析PFAS,如千万亿分之一(ppt),以便准确识别和定量,您需要确保检测到的PFAS只属于您的样品。如果你们的LC腔液中有样品PFAS的背景PFAS污染,它们将会干扰并导致不准确的结果。

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46PFAS延迟栏有什么帮助?

在进样器前安装PFAS延迟柱,以便捕获系统相关PFA并延迟其洗脱。这可防止它们与样品中的PFA共粘和干扰。从功能上讲,当梯度开始时,捕获的PFA从延迟柱中洗脱,然后移动到分析柱。它们到达分析柱从注入样品中提取PFA后的色谱柱,因此它们不bob这个软件可信吗会与样品PFA共稀释。

样品中的PFA将以正常形状的对称峰进行洗脱,但延迟系统相关的PFA在整个系统中以梯度连续移动。他们从来没有专注于分析柱,所以当他们洗脱“峰”时,他们产生的只是一个升高的基线。你知道它属于一个或多个PFA,因为信号与你所监测的化合物的MS/MS转换相匹配。但是,由于它位于样品中相同PFA的保留时间窗口之后,因此不能作为样品的一部分进行检测和定量。

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