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常见问题(FAQ):高效液相色谱法和超高压液相色谱法

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  1. 我可以在LC柱上注入多少样本,同时还能避免谱带展宽?
  2. 如果我改变列的大小,我应该改变多少我的注射体积?
  3. 如果样品溶剂比流动相强,会发生什么情况?
  4. 通过将样品注入较弱的注入溶剂(如100%水用于反相),是否可以获得更清晰的峰?
  5. 如何处理反压增加和其他堵塞或污染的迹象?
  6. 我如何确定LC的总柱体积或空体积?
  7. 为什么我在紫外光谱上看到联苯柱流血而在质谱上看不到?
  8. 用高效液相色谱法分析炸药(按照EPA方法8330B),我应该使用什么?

    猛禽LC列
  9. 新的Raptor联苯柱与Restek的其他联苯柱有何不同?bob手机网页版 秀目
  10. SPP硅基色谱柱究竟如何产生更高的效率和分辨率?
  11. Raptor联苯色谱柱在第一次使用前是否需要特殊的条件,或者是否一直处于闲置状态?
  12. 在Raptor联苯柱上梯度运行之间需要多少平衡时间?
  13. 哪些流动相溶剂与SPP或Raptor色谱柱相容?
  14. 我可以通过Raptor联苯柱向后泵送溶剂来清洁它吗?
  15. 我能在猛禽纵队上注射多少?
  16. 猛禽ARC-18列与普通c18有何不同?
  17. 猛禽ARC-18柱在酸和碱方面的工作情况如何?
  18. Raptor ARC-18色谱柱能与100%水流动相使用吗?
  19. 我们怎么知道猛禽纵队是崎岖不平的?

    警卫队列
  20. 我需要什么类型的LC护柱系统?
  21. 我的UHPLC色谱柱上bob手机网页版 秀目有Restek防护盒吗?
  22. 我应该使用哪种保护盒带?
  23. 我的三叉戟防护系统应该使用哪种盖玻璃料?
  24. 我可以将另一个供应商的Rbob手机网页版 秀目estek guard盒带用于我的专栏吗?

    硬件
  25. 我的HPLC柱的端部配件上有多大尺寸的螺纹?
  26. “10-32”是什么意思?
  27. LC除了10-32,还有其他尺寸的线程吗?
  28. HPLC用不锈钢配件与聚合物配件有何不同?
  29. UHPLC可以使用哪些配件?
  30. 如何拧紧配件?
  31. 我应该为哪个油管使用哪个配件?
  32. 我怎么知道我的LC管的内径是多少?

    HILIC的方法
  33. 如何避免HILIC方法出现问题?
  34. 我的Raptor HILIC-Si柱可以直接使用吗?
  35. 在注射之间我应该平衡我的Raptor HILIC-Si柱多长时间?
  36. 用于HILIC分离的注射溶剂是什么?
  37. 在HILIC分离时,我需要注意什么样的pH值影响?
  38. 我可以为HILIC分离使用缓冲区吗?什么类型,什么浓度?

    什么是PFAS延迟列?
  39. pfa是什么?
  40. 什么是GenX和PFBS?
  41. 什么样的实验室进行PFAS测试?
  42. 什么是典型的PFAS分析水平?
  43. PFAS分析与其他LC-MS/MS分析相比有什么不同?
  44. 我如何知道我的LC系统是否有PFAS污染?
  45. 为什么从我的样品中分离与系统相关的PFAS很重要?
  46. PFAS延迟列有什么帮助?

如果您的问题没有出现在列表中,请联系Restekbob手机网页版 秀目的专家化学家,以帮助对HPLC和UHPLC系统和分析进行故障排除。(请记住包括您的公司名称和完整的邮寄地址。)

1.我可以在LC柱上注入多少样本,同时还能避免谱带展宽?

进样量以及最佳流速受色谱柱尺寸的限制。理想情况下,如果样品与流动相在同一溶剂中,近似体积应如下所示:

列ID 卷(µL)
2.1毫米(30 -100毫米长) 1-3
3.0-3.2毫米(50-150毫米长) 2 -
4.6毫米(50-250毫米长) 8-40

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2.如果我改变柱的大小,我应该改变多少注射量?

最佳喷射体积直接与柱的圆柱体体积有关,因此取决于横截面积(A=πr2.)和列的长度(L)。既然如此,您就可以根据现有的注入量方法来估计任何调整。

如果您正在转换为不同尺寸的ID(包装材料和长度保持不变),只需将当前体积乘以半径的平方,以确定新方法的正确体积。例如,如果你现在在150 x 4.6 mm的色谱柱上注射20µL,然后切换到150 x 3.0 mm的色谱柱,你可以通过20乘以(1.5)来估计调整的体积2.)/(2.32.).你的新体积应该是8.5 μ L。

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3.如果样品溶剂比流动相强,会发生什么情况?

我们不建议注入强溶剂,因为它通常会导致峰畸变、展宽、灵敏度差和保留时间缩短。这是因为一些分析物在色谱柱中的移动速度太快,而不是在对称的色谱带中洗脱。如果你一定要这样做,保持体积尽可能小,并确保溶剂是可混溶的。

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4.通过将样品注入较弱的注入溶剂(如100%水用于反相),是否可以获得更清晰的峰?

在这种情况下,样品最初集中在柱的顶部,并在一个紧带中穿过柱。这种技术被称为“柱上压缩”或“点注入”,有时用于在更大体积的样品注入中最小化带宽(参见上面的FAQ #8)。请记住,您的样品组件必须是可溶解在流动相,以便工作。

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5.如何解决背压增加和其他堵塞或污染迹象?

请遵循我们博客中的建议”对高效液相色谱(HPLC)施加压力?“这将帮助您确定或确认压力来源。如果发现色谱柱本身是困难的来源,请按照我们的LC柱清洗建议页面。为了避免将来发生这种情况,Restek强烈建议使用保护柱来保护反相和bob手机网页版 秀目正相分析LC柱不受熔块堵塞和柱污染的影响。

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6.我如何确定LC的总柱体积或空体积?

“柱体积”一词通常是指空隙体积,它代表在二氧化硅颗粒之间流动相的体积。这个区域称为间隙区。你可以通过乘以总柱体积(x半径)来估计空隙体积2.x长度)的一个系数,该系数用于估计特定柱类型的典型填料效率。对于全多孔柱,空隙体积(单位:mL)的方程为V=(0.68)pi r2.五十、 式中,V=以毫升为单位的柱体积,r=以厘米为单位的柱半径,L=以厘米为单位的柱长度。对于表面多孔柱,如我们的Raptor柱,系数不同,方程为V=(0.50)pi r2.l

通常通过注入含有已知在特定柱相上无保留或可忽略保留的分析物的标准物来通过实验估算空隙体积。反相高效液相色谱法的一个很好的例子是尿嘧啶。需要注意的是,该估算值还受到所用特定仪器的额外柱死体积的影响,因此可能略有不同。

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7.为什么我在紫外线上看到联苯柱出血,但在质量规格上看不到?

所有相(包括苯基相)都固有少量相渗出,并且在一定程度上取决于色谱柱的大小和尺寸。这种渗出通常可以忽略不计,并且不影响保留时间,但可能是可见的,尤其是通过UV检测。调节后通常可以减少。usi也可以将渗出降至最低采用等度洗脱、较浅梯度和/或在两次运行之间采用梯度冲洗。

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8.用高效液相色谱法分析炸药(按照EPA方法8330B),我应该使用什么?

虽然没有一个LC柱可以为所有这些分析物组合提供基线分离,但是猛禽联苯猛禽ARC-18来自Restek的列是初级bob手机网页版 秀目和确认分析的杰出选择。全孔高效液相色谱颗粒,即超C8超Aromax列也是一个选项。请记住,各种色谱相可能提供这种方法的部分解决方案,但Restek发现这些对提供了最佳结果。bob手机网页版 秀目

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猛禽LC列

9新的Raptor联苯柱与Restek的其他联苯柱有何不同?bob手机网页版 秀目

Raptor联苯是由表面多孔的二氧化硅颗粒制成的,通常简称为SPP。SPP二氧化硅具有固体核心和多孔外层,其直径是典型的高效液相色谱颗粒,在这种情况下,2.7µm。SPP色谱柱表现出更高的效率和分辨率,通常接近更小的(如1.9µm) UHPLC颗粒,基于全多孔二氧化硅。使用固体核粒子还有一些额外的好处。SPP二氧化硅颗粒可以在高流速下操作,而不会显著影响色谱柱的分辨率,而且它们不需要像UHPLC色谱柱那样需要更高的压力系统组件。(在常规高效液相色谱系统上实现像UHPLC那样的分离是很好的!)

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10.SPP硅基色谱柱究竟如何产生更高的效率和分辨率?

更高的效率主要是通过缩短溶质进入和离开颗粒和流动相的转移时间来实现的,但更均匀的粒径也会提高效率,从而导致更一致的填充。从更理论的角度来看,范·迪姆特方程是解释这一现象的最佳方法。较好的效率在这里表示为较短的板高度(H)。

Van Deemter方程描述了柱流量和峰值效率之间的关系,称为带宽。

图-article-GNOT3395-01.jpg

SPP二氧化硅的实心芯导致A和B项的值较低(涡流扩散和纵向扩散)而且,它能更好地传递溶质,转化为较低的传质组分值,即C项。因此,在高流速下,可以实现较短的理论板高度H和较高的效率。UHPLC颗粒也是如此,但对于正常分析尺寸的SPP颗粒,柱压不会降低与UHPLC的情况一样,SPP颗粒的形状通常也更均匀,并导致更一致的填充,这也提高了整体效率。所有这些因素都显著降低了我们通常与SPP硅胶柱相关的谱带展宽。

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11Raptor联苯柱在首次使用前是否需要进行特殊调节,或者是否处于闲置状态?

在大多数情况下,Raptor联苯柱的行为与任何其他反相柱一样。然而,在某些情况下,可能需要更长的平衡时间。在有机溶剂(如乙腈和甲醇)之间切换可能需要在高有机流动相中冲洗15-20分钟。

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12在Raptor联苯柱上梯度运行之间需要多少平衡时间?

无论您使用的是全多孔二氧化硅还是SPP二氧化硅,如果您使用的是梯度,并且两种类型的色谱柱的时间量相似,则两次运行之间都需要一些平衡时间。通常,除非您使用离子配对技术,否则7个色谱柱(空隙)体积的当量就足够了。

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13哪些流动相溶剂与SPP或Raptor柱相容?

任何通常用于反相LC的溶剂都可以很好地工作,包括但不限于水、甲醇和乙腈。

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14我可以通过Raptor联苯柱向后泵送溶剂来清洁它吗?

类似于UHPLC色谱,这些色谱柱不建议反向流动。然而,你仍然可以泵过一系列溶剂,只要它们是混溶的。

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15我能在猛禽柱上注射多少?

进样量取决于许多因素,包括柱尺寸、样品溶剂和分析要求。作为色谱的一个很好的实践,尝试尽可能少的注入,在相同或较弱的溶剂比你bob娱乐官网的流动相。

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16.猛禽ARC-18列与普通c18有何不同?

显著的差异是结合相的强度。在ARC-18中,任何残留的硅醇基团都通过空间位阻保护被屏蔽并变得惰性。结果是更宽的操作pH值范围为1.0-8.0。ARC-18在pH值为1.0至3.0之间特别有用,在此条件下,其他C18色谱相可能开始降解。像Raptor联苯柱一样,固定相连接到表面多孔的二氧化硅颗粒(SPP)。请参阅我们的早期常见问题关于SPP的优势。

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17Raptor ARC-18色谱柱对酸和碱的作用如何?

ARC-18为带电荷的基座提供了额外的保留,在许多情况下,优于传统的端盖C18。对于中性酸,它工作得很好,比端盖帽的C18相更好,特别是在pH < 3。ARC-18也适用于中性碱和带电酸,但提供了更多的优势,在较低的pH范围表现最好。

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18.Raptor ARC-18色谱柱能与100%水流动相使用吗?

不。我们建议使用猛禽ARC-18立柱至少有5%的有机物在流动相中。对于含水量要求较高的应用,我们建议采用超水相C18Pinnacle DB含水C18色谱柱.

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19.我们怎么知道猛禽纵队是崎岖不平的?

我们使用不容易被样品基质堵塞的熔块,柱填料不太可能被可能发展的更高压力破坏。增加的保护护柱也可用,并建议进一步延长列的寿命。访问www.bob手机网页版 秀目restek.com/raptor要查看这些专栏的使用情况并在竞争中进行测试,但作为最终证明,我们鼓励您自己尝试。

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警卫队列

20.我需要什么类型的LC护柱系统?

防护柱系统由支架和药筒组成,正确的选择取决于您使用的技术和分析柱。Restek提供三种护柱系统EXP、Roc和Trident(直连式和直列式)-每种系统的设计都与我们的一种LC柱系列相匹配,并用于特定技术。bob手机网页版 秀目

EXP支架和墨盒
  • 支架与所有通过UHPLC的仪器和药筒兼容(额定值为20000 psi[1400+巴])。
  • 设计用于猛禽和力LC柱。
Roc持有人和子弹
  • 与传统的HPLC仪器兼容。
  • 设计用于Roc HPLC柱。
三叉戟直接支架和弹药筒
  • 与传统的HPLC仪器兼容。
  • 设计用于传统HPLC柱(Ultra、Pinnacle II、Pinnacle DB、Allure、Viva)。
  • 提供三个级别的保护。
三叉戟在线持有人和墨盒
  • 与传统的HPLC仪器兼容。
  • 设计用于传统HPLC柱(Ultra、Pinnacle II、Pinnacle DB、Allure、Viva)。
  • 需要将耦合器连接到分析柱。

有关更多详细信息,请参阅我们的LC保护柱选择指南.

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21.我的UHPLC色谱柱上bob手机网页版 秀目有Restek防护盒吗?

我们有保护墨盒和持有人可用的Raptor 1.8 μ m UHPLC色谱柱。作为一个替代UHPLC,你可能会发现一个在线过滤器是有益的。

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超屏蔽UHPLC柱前过滤器

图- - gnot3395 - 03.条jpg


UltraLine UHPLC在线过滤器

与我们的三叉戟直接防护系统类似,UltraShield过滤器直接拧入入口的柱端配件。UltraLine过滤器需要在每一侧进行管道连接;如果安装在喷油器和转向柱之间,则EXP耦合器建议使用。

另一个不同之处在于熔块,或者你可以称之为过滤器。“超盾”装置有一个不可替换的钛过滤器。因此,整个过滤器组件作为一次性物品使用。另一方面,UltraLine过滤器具有可更换的不锈钢过滤器,并可根据需要订购更多的过滤器。

两个装置中的过滤器的孔隙率均为0.5µm,且两个支架组件的密封压力高达15000 psi。因此,它们在功能上是等价的。

ultrashileld过滤器可与Restek UHPLC色谱柱的任何家族和相兼容,而Raptor UHPLC护柱可与1.8µm Fbob手机网页版 秀目orce和1.9µm Pinnacle DB UHPLC色谱柱的匹配相兼容。

有关更多详细信息,请参阅我们的LC保护柱选择指南.

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22我应该使用哪种保护盒带?

一旦你知道你需要哪个保护柱系统,下一步就是选择包装和尺寸最适合你的分析柱的LC保护筒。为了在不损害选择性或效率的情况下获得最大限度的保护,您应该选择包含相同包装材料的LC保护盒(包括固定相和硅胶)作为您的分析柱。例如,与Raptor联苯2.7 μ m分析柱配合使用的最佳LC保护柱是Raptor联苯2.7 μ m保护柱。

除了选择与分析柱相匹配的保护盒包装外,还需要选择内径(ID)正确的LC保护盒。一个好的一般规则是LC保护柱盒带ID应与分析柱的ID相同,或比分析柱的ID小一个尺寸。因此,4.0 mm内径的防护筒应与4.6或4.0 mm内径的分析柱一起使用,而2.1 mm内径的防护筒建议用于3.2、3.0和2.1 mm内径的分析柱。

看到我们的LC保护柱选择指南有关哪些防护与哪些特定的分析列兼容的详细信息。

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23我的三叉戟防护系统应该使用哪种盖玻璃料?

1级和3级三叉戟滤清器端部配件上的盖玻璃料将捕获较大的微粒,并最大限度地延长防护筒的使用寿命。根据样品基质的性质以及在某些情况下流动相混合物的性质选择孔隙度。孔隙率为2µm的玻璃料可在大多数情况下使用,订购时为标准尺寸。0.5µm玻璃料为未经预过滤或样品制备过程中缺乏清洁的样品提供了更好的保护。当使用粒径为3µm的分析柱或使用含有较高水平缓冲盐的流动相时,较小的孔隙率也可能更有利。

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24我可以将另一个供应商的Resbob手机网页版 秀目tek guard盒带用于我的专栏吗?

您可以使用Ultra或Roc 5µm的完全多孔颗粒(FPP)色谱柱,颗粒大小为3µm或更大,只要包装材料非常相似。对于“核-壳”或表面多孔颗粒(SPP),相似的相和颗粒尺寸可以使用Raptor 2.7µm或5µm守卫器。对于小于2 μ m的FPP或SPP颗粒,Raptor UHPLC保护柱可用于类似的相。确保使用适当的Roc, Trident,或猛禽守卫支架。一些与我们相似的柱固定相/包装材料是在这个图表中列出方便参考。

在某些情况下,固定相可能非常独特,因此您可能需要从同一供应商处购买防护筒用品,以获得最佳效果。如果您对此有任何疑问,请随时致电我们。

我们建议仅使用带Restek防护墨盒的Restebob手机网页版 秀目k防护墨盒支架,以确保正确安装。

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硬件

25我的HPLC柱的端部配件上有多大尺寸的螺纹?

所有HPLC和UHPLC柱上的配件都有10-32个螺纹。但是,您会发现Waters、Rheodyne、SSI、Gasukura的管件和立柱具有不同的底座深度,如下所示,即使螺纹仍然为10-32。雷斯特克氏bob手机网页版 秀目通用10-32 PEEK柱连接器和新EXP配件将适应这些配置中的任何一种。

配件风格不同于不同的制造商,但所有的HPLC和UHPLC柱配件有10- 32线程。

图- - gnot3395 - 04.条jpg

帕克

图-article-GNOT3395-05.jpg

瓦尔科

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水域

图- - gnot3395 - 07.条jpg

微量进样器

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世伟洛克
帕克阿乐

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26.“10-32”是什么意思?

这是美国国家标准协会(ANSI)采用的命名约定。对于HPLC配件,第一个数字表明的直径螺纹部分的螺母(不是管,进入内部)。当直径小于1/4 "时,就像在这种情况下,使用测量值(测量值10)。连字符后面的数字是指每英寸的线程数,因此表示线程的“间距”。外螺纹尺寸和公差表可在这里:http://www.engineersedge.com/screw_threads_chart.htm

图-article-GNOT3395-09.jpg

10个仪表配件的直径约为3/16”。

图- - gnot3395 - 10.条jpg

尺寸为10-32的管件的螺纹数为每英寸32个螺纹。请注意,第一个螺纹用于在零位对齐管件,不包括在螺纹计数中。

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27.LC除了10-32,还有其他尺寸的线程吗?

10-32个线程可能是您将在HPLC中使用的唯一线程。但是,您偶尔会看到¼x 28或M6(M6 x 1的缩写形式)管件用于实验室设置或低压连接。¼x 28尺寸基于英制测量单位,如10-32。¼x 28螺纹相距更远,直径稍大,通常也不能承受更高的压力。M6接头为公制螺纹,直径为6 mm,间距为1 mm。

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28HPLC用不锈钢配件与聚合物配件有何不同?

最明显的区别是,不锈钢配件被“锻造”到管子上。它们用扳手拧紧,螺母牢固固定后,套圈永久固定在管道上。尽管这产生了一个良好的密封,能够承受高压,但套圈无法拆除和重复使用。为了更换套圈或重新安装在新管道上,必须切割整个管件和一小段管道,以牺牲套圈和一小段管道。(通常,螺母仍可重复使用。)

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预先安装在Restek混合毛细管上的不锈钢配件(bob手机网页版 秀目第26533类)

好消息是像Restek这样的聚合物配件bob手机网页版 秀目通用10-32连接器和hybrid-ferruleEXP配件,不需要对油管进行永久性锻造;因此,所有零件都可以重复使用。EXP接头特别有用,因为它们可以承受更高的压力,而套圈在某种程度上仍然可以重复使用。EXP接头可重复使用的次数与施加的扭矩量直接相关。当用手指拧紧接头时,套圈可以重复使用多次,而如果用扳手拧紧UHPLC接头,套圈可以重复使用几次。限制是由于套圈有一定程度的变形,而不是由于模锻。

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PEEK指密配件(猫。# 27710)

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29UHPLC可以使用哪些配件?

你可以使用不锈钢配件,就像那些与你的UHPLC系统或你可以使用EXP配件. 当用扳手拧紧时,EXP接头的使用压力可达20000 psi。在任何情况下,始终确保使用零死容量的配件,以便UHPLC提供的高效率不会因额外死容量而受损。

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30如何拧紧配件?

我们基于聚合物的通用接头和PEEK接头只需要手动拧紧,而任何不锈钢配件都需要用扳手拧紧。EXP配件可以以任何方式使用。手动拧紧可用于8700 psi或扳手拧紧可用于20000 psi。请注意,过度拧紧会导致磨损并损坏螺纹。需要用扳手拧紧的管件通常需要手动拧紧¼圈,以实现密封。不幸的是,没有通用扭矩设置。

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31我应该使用哪些配件来安装哪些管子?

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惯例告诉我们将管件材料与管道材料相匹配:将PEEK管件与PEEK管道一起使用,将不锈钢管件与不锈钢管道一起使用。主要原因是系统压力。但是,一些不锈钢配件可与PEEK管一起使用。例如EXP配件采用钛/聚醚醚酮混合结构,可与聚醚醚酮或不锈钢管一起使用。然而,如果考虑惰性,应避免使用不锈钢配件,PEEK配件是更好的选择。请注意,PEEK不建议用于某些强酸溶液,如王水,在某些条件下,它可能会受到卤化溶剂以及THF的影响。不锈钢对于大多数流动相试剂和溶剂是安全的,但它的惰性较低,特别是对无机酸、碱和氧化剂。

EXP配件采用钛/聚醚醚酮混合结构,可与聚醚醚酮或不锈钢管一起使用。

其他类型的管,如PTFE和Tygon管,与PEEK或聚乙烯(PE)接头,管接头和适配器工作良好。许多接头不是螺纹的,而是滑套的,因为它们用于低压应用。一个很好的例子就是在高效液相色谱中从瓶/容器到泵的流动相输送。这是一个低压输送(HPLC和UHPLC系统保持高压从泵到柱的末端),PTFE管和PTFE或PE配件通常使用。

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PEEK接头(猫。# 27715)

图- - gnot3395 - 15.条jpg

Bluestem玻璃溶剂过滤器

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32.我怎么知道我的LC管的内径是多少?

图-article-GNOT3395-16.jpg

UHPLC系统采用肉眼无法识别的极窄口径油管。由于这个原因,油管长度是基于内径的颜色编码。bob手机网页版 秀目Restek提供不锈钢毛细管彩色带:红色= 0.005 ",黄色= 0.007 ",蓝色= 0.010 "和橙色= 0.020 "。颜色编码因制造商而异;它不是普遍的。同样重要的是,不锈钢毛细管应该由制造商切割长度,而不是由客户。如果没有专业的加工刀具,就不可能实现干净的方形切割。带预压卡箍的不锈钢管件或带混合卡箍的EXP管件与不锈钢管一起使用,在高达20,000 psi的UHPLC下实现密封性。

LC级不锈钢管的内径由管道上的彩色带标识预切割长度.

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HILIC的方法

33.如何避免HILIC方法出现问题?

HILIC方法是一种强大的工具,特别是用于分析极性化合物,但它可能具有挑战性,为了避免常见的缺陷,您需要注意几个重要的注意事项。我们的技术文章介绍HILIC技术,讨论常见的问题领域,并帮助您成功地将HILIC方法纳入您的实验室曲目。

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34我的猛禽HILIC Si柱准备好开箱即用了吗?

在使用之前,您的Raptor HILIC Si柱必须使用分析期间使用的流动相进行适当调节。对于等度HILIC方法,应使用至少50个柱体积,对于梯度HILIC方法,应至少执行10次空白进样,运行完整的时间程序。当您改变流动相组成或任何添加剂的浓度时,也需要调节。使用与第一次调节色谱柱时相同数量的色谱柱体积或空白进样。下表I给出了基于尺寸的Raptor HILIC Si柱的柱体积。

表一:基于Raptor HILIC-Si柱尺寸的柱体积(mL)

列ID 列长度

30毫米

50毫米

100毫米

150毫米

2.1毫米

0.05

0.1

0.2

0.3

3.0毫米

0.2

0.4

0.5

4.6毫米

0.4

0.8

1.2

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35.在注射之间我应该平衡我的Raptor HILIC-Si柱多长时间?

除了使用流动相对色谱柱进行初始调节外,在进样之间重新平衡色谱柱也是至关重要的。由于HILIC方法中的分离机制涉及到颗粒表面上水层的吸附,因此在两次注射之间完全重建或“重置”该水层以确保保留时间重现性非常重要。我们建议在梯度程序恢复到初始条件时,以至少10个柱体积进行平衡,或在等度分离中,从最后一个峰的保留时间开始,以至少10个柱体积进行平衡。完全再平衡所需的柱体积数量可能与分析物密切相关,尤其是等度分离,因此确保在HILIC方法开发过程中调查保留时间再现性。

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36我应该使用什么样的注射溶剂进行HILIC分离?

进样溶剂应尽可能接近初始流动相条件,这是HILIC分离的高有机含量。通过将注入溶剂与初始流动相条件相匹配,可以获得更好的峰形状、更高的保留率和更高的灵敏度。

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37.在HILIC分离时,我需要注意什么样的pH值影响?

pH值对分析物荷态的影响取决于每种化合物的pKa,因此在方法开发过程中必须仔细评估pH值的影响。在HILIC方法中,流动相中有机溶剂的高浓度提高了pH值,实际洗脱液的pH值可以比单独的水部分高1-1.5个单位。柱本身的电荷状态也会受到影响。例如,在Raptor HILIC-Si色谱柱中,裸二氧化硅的pKa介于3.8和4.5之间,因此流动相pH改变了二氧化硅表面的电荷,使其在非常酸性的条件下呈中性,并在pH开始接近3.8或更高时电离(带负电荷)。由于这个原因,如果你的分析物有一个或多个质子化胺或季胺基团,它是Raptor HILIC-Si色谱柱上的一个很好的候选分析物。

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38.我可以为HILIC分离使用缓冲区吗?什么类型,什么浓度?

许多HILIC分离使用质谱仪作为检测器,所以像甲酸铵和乙酸铵这样的挥发性缓冲液是非常常见的。然而,流动相的高有机含量会导致缓冲盐沉淀,这可能导致停机维护仪器。此外,高缓冲液浓度会降低分析物的保留,从而影响色谱。bob娱乐官网为了避免这些影响,需要对方法进行优化,10 mM是缓冲液浓度的一个很好的起点。为了保证MS检测器响应的一致性,A和B流动相在梯度过程中保持离子强度恒定,应该进行相同的缓冲。与MS供应商确认他们为ESI源推荐的最大缓冲液浓度。

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PFAS延迟列

39.pfa是什么?

PFA是全氟或多氟烷基物质,用作各种产品制造中的表面活性剂,如消防泡沫、涂料添加剂(如不粘锅和平底锅)、纺织品(防水服、防污地毯)和清洁产品。它们极难在环境中分解,在世界各地的土壤、空气、地下水、城市垃圾和垃圾填埋场渗滤液中都能找到。两种最常见的全氟辛酸(PFOA)和全氟辛烷磺酸(PFOS)。

图-article-GNOT3395-17.jpg

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40GenX和PFBS是什么?

这两种化合物是在过去10年内制成的,用于取代全氟辛烷磺酸和全氟辛烷磺酸。对于GenX(六氟环氧丙烷二聚酸铵盐,或HFPO-DA,于2009年推出)和PFBS(全氟丁烷磺酸,于2003年发布)的安全性,仍然存在健康和环境方面的担忧,许多环境实验室开始对其与全氟辛烷磺酸和全氟辛烷磺酸进行测试。

图- - gnot3395 - 18.条jpg

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41.什么样的实验室进行PFAS测试?

PFAS分析由合同环境实验室、州和地方政府实验室以及市政水处理实验室完成。其他可能进行PFAS测试的实验室包括大学和食品和饮料实验室,测试其进水供应。PFAS测试最近也扩展到空气测试,因此空气质量实验室可能会将PFAS添加到其分析物列表中。

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42.什么是典型的PFAS分析水平?

PFAS检测水平因地区和基质(如饮用水、废水、海水、土壤等)而异。饮用水是公共健康最受关注的因素,许多环境机构正试图设定安全的消费水平。大多数都是以健康为基础的推荐水平,截至2019年2月没有相关规定。目前,在大多数国家,饮用水中大多数PFAS化合物的指定关注水平在低ppt (ng/L)范围内。下面给出了一些例子。

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43.PFAS分析与其他LC-MS/MS分析相比有什么不同?

LC-MS/MS分析是一种非常敏感的,选择性的技术,被用于许多不同的应用,是多分析物分析的理想选择。由于其化学/物理特性和持久的惰性,塑料含氟聚合物,如聚四氟乙烯(PTFE),被用于制作许多LC-MS/MS组件。你可以在LC泵的密封件,流动相传输线,用于除气器的塑料衬里中发现聚四氟乙烯。不幸的是,这些塑料部件会将PFAS浸到流动相中,从而产生与系统相关的背景PFAS污染,干扰微量PFAS分析。由于饮用水中的PFAS检测水平在ppt范围内,即使是轻微的干扰也会对定量分析产生偏差。

由于PFAS化合物的普遍使用,PFAS干扰也可能来自用于制造流动相的溶剂(甚至是新的瓶子)。全氟辛烷磺酸也存在于空气中,所以你可以假设全氟辛烷磺酸污染物在低浓度下无处不在。基本上,与系统相关的PFA来自LC-MS/MS工作流程所有阶段的组件,包括样品收集瓶、流动相盖/衬里(由PTFE制成)、溶剂入口管(通常为FEP或PFA)、脱气器、LC泵部件,甚至自动进样器小瓶隔片(许多是PTFE衬里硅胶)。

观察到的干扰程度会因LC仪器制造商而异,也取决于方法参数(例如平衡时间、溶剂选择、目标分析物等)。注意,平衡时间越长产生的干扰越多,因为PFAS有更多的时间从塑料部件中浸出。

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44.我如何知道我的LC系统是否有PFAS污染?

识别LC中PFAS污染的最简单方法是泵送流动相通过色谱柱30分钟,使系统相关的PFAS有机会在柱的顶部聚集。然后,注入溶剂空白,当梯度通过色谱柱时,建立在分析柱上的任何PFAS将洗脱,并在保留时间匹配样品中PFAS的洗脱时间出现。

接下来,在溶剂空白注入后立即注入另一个溶剂空白,平衡时间较长,并查看PFAS化合物的保留时间。第二次进样的目的是没有足够的时间让系统相关PFA在分析液相色谱柱中形成。

比较立即注入和长平衡时间注入的结果。如果在长平衡时间进样中有PFAS峰,但在随后的进样中没有,则LC含有系统生成的PFAS污染物,可能会干扰痕量分析。如果在两次进样中寻找的PFAS保留时间没有任何峰值,则仪器可能没有大量系统相关PFAS干扰。如果您将旧LC装置与新的质谱系统一起使用,则可能会发生这种情况,因为大多数与可浸出系统相关的PFA已经浸出。但是,这不是一个永久性的国家;如果在喷油器之前更换仪器任何部件中的塑料部件,则极有可能会滤除系统相关的PFAS干扰,除非新部件不含PFAS。

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45.为什么从我的样品中分离与系统相关的PFAS很重要?

如果您是在非常低的水平分析PFAS,如千万亿分之一(ppt),以便准确识别和定量,您需要确保检测到的PFAS只属于您的样品。如果你们的LC腔液中有样品PFAS的背景PFAS污染,它们将会干扰并导致不准确的结果。

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46.PFAS延迟列有什么帮助?

在进样器前安装一个PFAS延迟柱,因此它捕获系统相关的PFAS并延迟它们的洗脱。这可以防止它们bob这个软件可信吗与样品中的PFAS共洗脱和干扰。功能上,当梯度开始时,捕获的PFAS从延迟柱中被洗脱,然后移动到分析柱。他们到达分析柱后,从注入的样品的PFAS,所以他们不与样品的PFAS腔。

样品中的PFAS将洗脱为一个正常形状的对称峰,但延迟的系统相关的PFAS一直随着梯度在整个系统中不断移动。他们从来没有关注过分析柱,所以当他们洗脱他们产生的“峰值”只是一个升高的基线。你知道它属于一个或多个PFAS,因为信号与你所监测的化合物的质谱/质谱转变相匹配。但是,由于是在您的样品中相同的PFAS保留时间窗之后,所以没有作为样品的一部分进行检测和定量。

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