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“检测漏洞百出的样本”?用LC-MS/MS检测尿液中裸盖菇素和裸盖菇素的含量

2021年10月15日
通过
  • Ravali Alagandula
标签
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“神奇蘑菇”的活性成分,裸盖菇素(PC)和裸盖菇素(PB),负责其精神作用时,摄入。这些化合物最近在实验室中得到了很多关注,因为一些县已经将微剂量的神奇蘑菇提取物合法化,因为它们在治疗丛状头痛、焦虑和抑郁等疾病方面具有潜在的治疗特性。在之前的博客中,我曾讨论过一种方法来测试蘑菇提取物中这些极具极性、难以保留的化合物的效力。

随着神奇蘑菇衍生产品的商业化,也出现了从临床角度测试这些活性成分存在的需求。PB和PC在自然界是极性的,很难在典型的反相色谱柱上保留。此外,裸盖菇素由于源内片段而被去磷酸化为裸盖菇素,因此需要基线分离来准确识别这些化合物。在这里,我们提出了两种简单的溶剂蛋白沉淀法分离尿液中裸盖菇素和裸盖菇素的分析方法:1。将这些化合物添加到Restek的一个简单方法bob手机网页版 秀目“大痛苦”方法,与231种药物滥用和2。尿液中裸盖菇素和裸盖菇素的独立分析方法。

第一步是简单的样品制备

在混合尿液中制备500 ng/mL裸盖菇素和裸盖菇素的标准混合物,以获得具有代表性的临床基质。从标准品中取50µL,与10µL内标(psilocin-D10, 20µg/mL)和100µL甲醇混合。混合物在3000rpm下旋转10秒,在4300 rpm下离心10分钟,10°C。离心后,我增加了稀释步骤,以消除溶剂不匹配的常见问题。由于这些化合物洗脱速度快,样品稀释剂不匹配会导致分辨率损失和峰形差。因此,我用流动相A(水,0.1%甲酸+ 2mm甲酸铵)稀释提取物20倍。因此,用含有0.1%甲酸和2mm甲酸铵(流动相A)的水900µL(稀释倍数20倍)稀释100µL的上清。值得注意的是,与0.1%甲酸单独加入样品稀释剂相比,在样品稀释剂中加入甲酸铵提高了灵敏度。

选择1 -快速添加这些化合物到你的疼痛面板

对于已采用我们单一方法进行药物滥用和疼痛管理分析物的实验室,本样品制备和分析物套装可直接应用于你们的方法。样本,提取后(样本准备如上所述),使用我们之前发表的确切条件运行大的痛苦适用于231个分析物[1]的面板法。如图1所示,两种分析物都被很好地分离,保留因子>5和Raptor联苯色谱柱的选择性允许这些新的化合物添加到现有的方法中,为实验室提供了一种无缝的方法,以提高效率和生产率。采用岛津HPLC, SCIEX API 4000 MS/MS分析裸盖菇素和裸盖菇素。仪器条件和分析物转变如下(表1和表2)。

博客-测试-漏洞百出的样本-检查- - psilocin和裸盖菇素-分析- -尿的lc - msm - 01. - png

图1:用Restek“大痛”法在500ng /mL人尿中分离裸盖菇素和裸盖菇素。bob手机网页版 秀目

表1:仪器条件

分析专栏:

Raptor Biphenyl 100x2.1mm, 2.7µm (PN: 9309 a12

警卫队列

Raptor Biphenyl EXP guard column cartridge 5.0, 2.1mm, 2.7µm (PN: 9309 a0252

流量:

0.6毫升/分钟

列临时:

30°C

流动相:

水,0.1%甲酸+ 2毫米甲酸铵

流动相乙:

甲醇,0.1%甲酸+ 2mm甲酸铵

样品稀释剂:

水,0.1%甲酸+ 2毫米甲酸铵

梯度:


时间

% B

0.01

5

9.00

One hundred.

10.00

One hundred.

10.01

5

12.00

停止

注入体积:

5µL

离子源

电喷射,积极的应急服务国际公司

检测器:

女士/小姐

表2:LC-MS/MS对裸盖菇素和裸盖菇素的MRM转换和保留时间。

不。

被分析物

保留时间(分钟)

前体离子。第一季度

定量离子。第三季

限定符离子。第三季

1

裸盖菇素

2.09

285.1

205.1

240.0

2

Psilocin-D10

2.74

215.1

66.1

3.

Psilocin.1

2.78

205.1

160.1

115.0

选择2 -尿液中裸盖菇素和裸盖菇素的独立分析方法

对于实验室,有兴趣开发一种快速的方法用于PC和PB,我也开发了一个2分钟的分析,总循环时间为3.5分钟。记住,由于源内碎片,我们需要对这些分析物进行基线分离。Raptor联苯柱被选择来实现这些极性分析物的选择性分离。我选择了50mm的柱长,2.1mm的内径,2.7µm的粒径。减小柱长的一个好处是,柱内的理论板的数量将减少,从而增加了该方法的吞吐量。优化这些尺寸增加了方法的吞吐量,同时保持分析物的分辨率和保持系统反压在HPLC的限制内,使其成为一种快速、可靠的方法,可以适用于任何仪器。因此,我们选择50x2.1 mm, 2.7µm, Raptor联苯柱,仅在2分钟内从尿液中分离裸盖菇素和裸盖菇素(图2,表3和表4)。

如果您有兴趣将当前的LC方法缩小到更小的柱格式,以减少运行时间,提高样品吞吐量,节省溶剂成本,并提高您的分析的整体效率,请查看我们的ProEZLC法翻译https://ez.bob手机网页版 秀目restek.com/ezlc-mt

博客-测试-漏洞百出的样本-检查- - psilocin和裸盖菇素-分析- -尿的lc - msm - 02. - png

图2:LC-MS/MS分离500ng/mL人尿中裸盖菇素和裸盖菇素。

表3:仪器条件

分析专栏:

Raptor Biphenyl 50x2.1 mm, 2.7µm (PN: 9309 a52

警卫队列

Raptor Biphenyl EXP guard column cartridge 5.0 x 2.1mm, 2.7µm (PN: 9309 a0252

流量:

0.5毫升/分钟

列临时:

35°C

流动相:

水,0.1%甲酸+ 2毫米甲酸铵

流动相乙:

甲醇,0.1%甲酸+ 2mm甲酸铵

样品稀释剂:

水,0.1%甲酸+ 2毫米甲酸铵

梯度:

时间

% B

0.01

5

0.20

5

2.50

95

2.51

5

3.50

停止

注入体积:

5µL

离子源

电喷射,积极的应急服务国际公司

检测器:

女士/小姐

表4:LC-MS/MS独立方法下裸盖菇素和裸盖菇素的MRM转换和保留时间

不。

被分析物

保留时间(分钟)

前体离子。第一季度

定量离子。第三季

限定符离子。第三季

1

裸盖菇素

1.36

285.1

205.1

240.0

2

Psilocin-D10

1.58

215.1

66.1

3.

Psilocin

1.60

205.1

160.1

115.0

我希望这个博客能帮助你在不断变化的药物监测和毒理学世界中导航。由于裸盖菇素和裸盖菇素正在走向合法化或合法化的道路上,您可以准备使用最适合您的实验室的方法来分析这些化合物。

引用:

S. Lupo,“大疼痛”:用LC-MS/MS分析231种多类药物和代谢物的无痛方法的发展,Restek公司,bob手机网页版 秀目https://www.bob手机网页版 秀目restek.com/en/technical -文学- library/articles/the -大-疼痛-发展- -疼痛-免费-方法-分析- 231 -多类药物和代谢物-由lc - msm

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